Набор БиоМастер RT-LAMP (2×) для обратной транскрипции и петлевой изотермической амплификации

Набор БиоМастер RT-LAMP (2×) предназначен для проведения обратной транскрипции (RT) и петлевой изотермической амплификации (LAMP) в одной пробирке. Набор БиоМастер RT-LAMP (2×) содержит 2× буфер для RT-LAMP; 25× БиоМастер RT-LAMP-микс, воду, обработанную ДЭПК и 6× буфер для нанесения. В состав 2× буфер для RT-LAMP входят все необходимые компоненты реакции (исключая ферменты, ДНК-матрицу и праймеры):

• буферный компонент;
• смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов;
• ионы Mg²⁺ (6 мМ).

В состав 25× БиоМастер RT-LAMP-микс входит ревертаза RNAscribe RT и LF Bst ДНК-полимераза в оптимальном соотношении для протекания обеих реакций.

RNAscribe RT – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность и проявляет оптимальную активность при 55°С (активна до 65°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 9 т.о. и включать модифицированные основания. Его быстрая скорость реакции позволяет выполнять синтез всего за 15 минут, а высокая рабочая температура фермента (до 65°C) обеспечивает высокий выход и специфичность реакции.

LF Bst ДНК-полимераза представляет собой большой фрагмент Bst (Bacillus stearothermophilus) полимеразы (полипептид 67 кДа), выделенный из штамма E. coli, несущего модифицированный клонированный ген. Фермент обладает 5´-> 3´ – полимеразной активностью, но не обладает 5′-> 3’ и 3′-> 5’-экзонуклеазной активностью, что позволяет использовать его для проведения изотермической амплификации, в том числе петлевой изотермической амплификации (LAMP – Loop-Mediated Isothermal Amplification). LF Bst ДНК-полимераза обладает высокой ДНК-цепь вытесняющей активностью и может применяться для изотермической амплификации ДНК. Наибольшую активность фермент проявляет в температурном диапазоне 60 – 65° С.

2× буфер для RT-LAMP оптимизирован для эффективного протекания как RT, так и LAMP. Добавки и усилители, входящие в него, позволяют проводить эффективную RT-LAMP со сложных и GC-богатых матриц.

Представленная форма набора для проведения RT-LAMP экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования. 6× буфер для нанесения на гель облегчает пробоподготовку для анализа в геле и контроль над ходом электрофореза.