Т4 ДНК-лигаза (200 е.а./мкл)

Продукт является рекомбинантным ферментом — ДНК-лигазой бактериофага Т4. Выделен из штамма E.coli, содержащего плазмиду с клонированным геном фермента бактериофага Т4. Имеет молекулярную массу 55,5 кДа.

Сшивает «липкие» и «тупые» концы с образованием фосфодиэфирной связи между соседними 5’-фосфатными и 3’-гидроксильными концами в двухцепочечных фрагментах ДНК или РНК, а также восстанавливает одноцепочечные разрывы в двухцепочечной ДНК. Для активности необходим кофермент АТФ. Оптимальная активность фермента — при температуре 16 °С, инактивации — при температуре 65°С в течение 10 минут.

Фермент находится в растворе для хранения и поставляется с реакционным буфером.

Состав буфера для хранения: 10 мМ Трис-HCl (рН 7,5 при 25 °С), 50 мМ KCl, 1 мМ DTT, 0,1 мМ EDTA, 50% глицерин.
Состав 10-кратного реакционного буфера: 50 мМ Tris-HCl (pH 7,5 при 25 °С), 10 мМ MgCl2, 1 мМ АТФ, 10 мМ DTT.

Одна единица активности соответствует количеству фермента, необходимому для сшивки 50% ДНК лямбда, гидролизованной HindIII (300 нг/мкл), в общем реакционном объёме 20 мкл за 30 минут при 16 °C в стандартном реакционном буфере.