EdU (5-этинил-2'-дезоксиуридин). Арт. 40540

Метаболическое мечение ДНК азид-модифицированными нуклеозидами позволяет проводить динамическую оценку синтеза ДНК de novo во время S-фазы клеточного цикла с минимальным вмешательством в ультраструктуры клеток и хроматина.
Процесс основан на азид-алкиновом циклоприсоединении, катализируемом медью (I) (CuAAC), или циклоприсоединении, промотируемом напряжением (SPAAC). Полученную функционализированную азидом ДНК можно впоследствии обнаружить с помощью биотина (через алкины биотина или биотин, функционализированный DBCO, соответственно) для последующих задач очистки или путем введения флуоресцентной группы (посредством алкинов флуоресцентных красителей или функционализированных DBCO флуоресцентных красителей, соответственно) для последующей микроскопической визуализации.

EdU (5-этинил-2’-дезоксиуридин) – нуклеозид, аналог тимидина, содержащий этинильную (ацетиленовую) группу. Является субстратом клеточных киназ и ДНК-полимераз, благодаря чему включается в состав ДНК при ее репликации. После включения EdU в структуру ДНК дочерних клеток этинильные фрагменты репортера можно метить с помощью азидов флуоресцентных красителей в присутствии медного катализатора. Флуоресценцию можно детектировать посредством микроскопии или использовать для сортировки дочерних клеток и клеток, не претерпевших деления.
В отличие от BrdU, репортерная группа встроенного EdU локализована в большой бороздке двойной спирали, где на алкин не влияют стерические препятствия Благодаря этому мечение ДНК осуществляется с высокой воспроизводимостью и без предварительной фиксации образца или денатурации нуклеиновых кислот.
Несмотря на некоторые преимущества по сравнению с окрашиванием BrdU, EdU обладает более высокой цитотоксичностью, и его включение в клеточную ДНК сопряжено с химическим повреждением нуклеиновой кислоты, вызывающим ее нестабильность, некроз и остановку клеточного цикла. Таким образом, токсичность и в целом негативное влияние EdU на биологические функции клеток ограничивают возможность использования нуклеозида для долгосрочных динамических исследований, требующих сохранения жизнеспособности объекта.
Тем не менее, EdU эффективен в широком спектре исследований, включая анализ клеточной пролиферации и дифференцировки, измерение активности эксцизионной репарации нуклеотидов, анализ ядерной архитектуры, исследования регенерации тканей, анализ клеточного цикла. Мечение EdU с последующим введением флуоресцентных красителей можно использовать для многоцветной визуализации хромосомной ДНК в качестве альтернативы нековалентному окрашиванию пропидием йодидом или с помощью FISH.
Недавно мечение EdU было использовано in vivo в модели ксенотрансплантата мыши. EdU вводился внутрибрюшинно, мышей умерщвляли и ДНК метили флуоресцентным азидом. Важно отметить, что маркировка EdU указывала на пролиферирующие области опухолей, что подтверждалось иммуноокрашиванием.

Технические характеристики:

• Молекулярная формула: C₁₁H₁₂N₂O₅
• Молекулярная масса: 252.22
• Растворимость: вода, ДМСО
• Контроль качества: ЯМР 1H, ВЭЖХ-МС (95%)