L-гомопропаргилглицин. Арт. 3313-100mg

Наиболее распространенным и простым методом мечения новых белков является метод BONCAT (Bioorthogonal noncanonical amino acid tagging) – биоортогональное неканоническое мечение аминокислот (BONCAT) с использованием аналогов метионина L-азидогомоаланин (AHA) и L-гомопропаргилглицин (HPG).
Суть метода заключается в том, что активная клетка во время синтеза белка может использовать не стандартную аминокислоту, а ее заместитель, сходный по химическим свойствам, конфигурации и размерам. Используемые для мечения аминокислоты содержат концевой алкиновый фрагмент, который позволяет использовать для визуализации хемоселективное лигирование или клик-реакцию между азидом и алкином или циклооктином. Алкин-модифицированный белок выявляют либо флуоресцентным азидом, либо азидом биотина. Чувствительность детектирования с этими реагентами в 1D-гелях и вестерн-блоттинге находится в диапазоне фемтомолей и совместима с последующим анализом ЖХ-МС/МС и MALDI.
Метод BONCAT обладает рядом преимуществ по сравнению с методом SILAC, который позволяет исследовать белки путем включения меченых изотопов.
Мечение AHA и HPG успешно используется in vitro (различные клеточные линии, первичные нейрональные клетки, органотипические культуры срезов), а также in vivo: аминоксилоты в концентрациях, достаточных для мечения, не токсичны, не влияют на скорость синтеза или деградации белка, что позволяет использовать их для кормления исследуемых организмов или внутрибрюшинных инъекций. AHA и HPG могут легко встраиваться в различные ткани молоди или эмбрионов, если их вводить беременным самкам.
BONCAT не ограничивается идентификацией недавно синтезированных белков, но также позволяет реализовать комбинацию подходов для сравнения изменчивости в разных протеомах или между субпопуляциями транслатомов в одном эксперименте.
Субклеточная фракционная иммуноочистка модифицированных комплексов с последующей BONCAT позволяет оценить пространственно-временную динамику белок-белковых взаимодействий или обогащение белками определенных субклеточных компартментов и органелл.
Мечение AGA и HPG с различными репортерами может помочь в получении информации о локализации белка, провести качественный (флуоресцентная визуализация) и количественный (выделение и ЖХ/МС/МС) анализ динамики синтеза и деградации конкретных белков в реальном времени.
BONCAT позволяет идентифицировать недавно синтезированные белки с низким содержанием и малым числом копий.

Метод BONCAT – быстрый и относительно недорогой метод изучения бактериального синтеза белка in situ на уровне одной клетки. BONCAT успешно применяется для изучения бактериальных сообществ, например, метаболизма и изменчивости почвенных бактерий; микроорганизмов, обитающих в строго анаэробных условиях или в морской среде, легочных бактерий.
Недавние исследования доказали возможность использования метода BONCAT для оценки синтеза белков растительных организмов, причем большая эффективность в данном случае установлена для HPG.

L-гомопропаргилглицин (HPG) – неканонический аминокислотный аналог метионина, который содержит концевой алкиновый фрагмент. Проницаемая для клеток молекула, которая во время трансляции включается в синтезирующий белок вместо метионина. Полученные полноразмерные алкин-меченые белки могут быть обнаружены с помощью катализируемой медью клик-реакции с флуоресцентными или мечеными биотином азидами и использованы для последующих задач микроскопии или очистки.

Технические характеристики:

• Молекулярная формула: C₆H₁₀ClNO₂
• Молекулярная масса: 163,60
• Растворимость: вода (макс. 125 мг/мл), ДМСО (макс. 250 мг/мл)
• Контроль качества: ЯМР 1Н и ВЭЖХ-МС (≥95%)