BrdU (5-бромо-2'-дезоксиуридин). Арт. 3478-1g

Индекс пролиферации и скорость деления клеток – важные показатели клеточного роста. Данные показатели являются мерой оценки активности опухолеобразования и опухолевой прогрессии. Одним из подходов к оценке пролиферативной активности и жизнеспособности клеток является идентификация и количественный учет клеток в состоянии S-фазы. Их можно идентифицировать по высокому содержанию ДНК-полимеразы и ядерного антигена пролиферирующих клеток (PCNA).
Хотя оба эти маркера можно выявить с помощью специфических антител, ни один из них не обнаруживается исключительно в клетках S-фазы. Решением этой задачи является введение в клетку модифицированных предшественников ДНК (обычно пиримидин дезоксинуклеозидов), которые фосфорилируются клеточными ферментами и могут встраиваться в структуру делящейся ДНК вместо нуклеотидов. В дальнейшем их можно выявить с использованием флуорохромов или антител, конъюгированных с ферментами.
Наиболее распространенными дезоксинуклеозидами для анализа репликации ДНК являются [3H]тимидин и 5-бром-2'-дезоксиуридин (BrdU).

BrdU – синтетический аналог тимидина, который встраивается в реплицирующуюся ДНК вместо природного тимидина во время S-фазы клеточного цикла. Полученную таким образом ДНК можно детектировать иммунохимически с помощью антител, специфичных к BrdU.
[3H]тимидин, встроенный в ДНК, обычно обнаруживается с помощью авторадиографии.
Оба подхода в равной степени эффективны при изучении кинетики клеточного цикла, репликации ДНК и обмена сестринскими хроматидами, а также для оценки клеточной пролиферации нормальных или патологических клеток и тканей в различных условиях.

Тем не менее, существует ряд объективных ограничений по использованию данных методов. Авторадиография [3H]тимидиновой метки отличается трудоемкостью и низкой скоростью обнаружения, поэтому не подходит для быстрых высокопроизводительных исследований. Кроме того, микроскопические изображения ДНК, меченой [3H]тимидином, имеют низкое разрешение и низкое отношение сигнал/шум.
В отличие от [3H]тимидиновой авторадиографии, иммуноокрашивание BrdU значительно быстрее и позволяет получить лучшее микроскопическое изображение меченой ДНК. Ограничением метода является то, что комплементарное спаривание оснований в двухцепочечной ДНК блокирует доступ антител к встроенному BrdU, поэтому требуется предварительная денатурация образцов в присутствии соляной кислоты или смеси метанола и уксусной кислоты, что ухудшают структуру образца, делает интенсивность окрашивания BrdU зависимой от условий подготовки образца и исключает возможность долгосрочных наблюдений в клетках с сохранной жизнеспособностью.

Тем не менее, мечение ДНК BrdU эффективно в исследованиях клеточного цикла методом проточной цитометрии. Например, возможно проведение параллельного окрашивания общей ДНК 7-AAD с последующим подсчетом и характеристикой клеток в зависимости от стадии клеточного цикла (G0/1, S или G2/M фазы) и использования дополнительных флуоресцентных антител, специфичных к белкам-маркерам апоптоза, воспаления, гематопоэза и т.д.

Технические характеристики:

• Молекулярная формула: C₉H₁₁BrN₂O₅
• Молекулярная масса: 307.10
• Растворимость: вода, ДМСО, ДМФА
• Контроль качества: ЯМР 1H и ВЭЖХ-МС (95+%)