LumiTracker Mito Orange CMTMRos

Липофильные цианиновые красители, такие как дигексилоксакарбоцианин (DiOC6(3)) и родамины, например, родамин 123, были первыми флуоресцентными зондами, которые использовали для оценки мембранного потенциала митохондрий. Эти красители свободно проникают через клеточные мембраны как по нернстовскому (зависящему от заряда) механизму, так и по их сродству к липофильным компонентам клеточных структур. Поскольку между цитозолем и внешней средой окружающей клетки, обычно существует внутренний отрицательный градиент потенциала в десятки милливольт, а между внутренней частью митохондрий и цитозолем этот показатель составляет более ста милливольт, равновесная концентрация катионного индикатора будет выше в митохондриях, чем в цитозоле, и выше в цитозоле, чем в среде. При этом гиперполяризация мембран будет способствовать дополнительному поступлению красителя из внешней среды, уменьшая общую флуоресценцию суспензии; напротив, снижение потенциала (деполяризация) приведет к высвобождению красителя в среду с последующим увеличением фоновой флуоресценции. Следует отметить, что спектры возбуждения и флуоресценции многих красителей хотя и зависят от их концентрации и локализации внутри клетки, однако этих изменений недостаточно, чтобы однозначно отличить и оценить флуоресценцию красителя в митохондриях от его флуоресценции в цитозоле.

CMTMRos также является гидрофобным катионным карбоцианиновым флуорофором, который диффундирует потенциал-зависимым образом через плазматическую мембрану и накапливается в активных митохондриях. Однако, в отличие от TMRM и родамина 123, краситель CMTMRos обладает реактивной хлорметильной группой, которая образует ковалентную связь с тиольными группами митохондриальных белков и пептидов. Это удерживает краситель внутри митохондрий при изменении мембранного потенциала и способствует его сохранению после фиксации образца с использованием альдегидов. Следует отметить, что данный краситель эффективен при флуоресцентной микроскопии растительных клеток и тканей, характеризующихся высоким уровнем аутофлуоресценции хлорофилла.
LumiTracker Mito Orange CMTMRos используется как витальный краситель для определения локализации и активности митохондрий в клетках и для анализа изолированных митохондрий методами флуоресцентной микроскопии, проточной цитометрии или с использованием флуоресцентного ридера.

Технические характеристики:

• Молекулярная формула: C₂₄H₂₄Cl₂N₂O
• Молекулярная масса: 427.38
• Контроль качества: ЯМР 1H и ВЭЖХ-МС (95+%)
• Максимум возбуждения/флуоресценции: 555 нм/578 нм
• ε, л⋅моль−1⋅см−1: 100000
• Квантовый выход флуоресценции: 0.64

Применение: флуоресцентная микроскопия, проточная цитометрия.