LumiTracker Mito JC-1. Арт. 2275-5mg

Апоптоз включает каскад событий, в числе которых потеря митохондриального трансмембранного потенциала (ΔΨM). На протяжении всей жизни клетки митохондрии используют окисляемые субстраты для создания градиента электрохимического потенциала, который необходим для транспорта через митохондриальную мембрану анионов в цитоплазму клетки, а протонов – внутрь органелл и последующего синтеза АТФ. ΔΨM является важным параметром функционирования митохондрий и может использоваться в качестве индикатора жизнеспособности клеток и маркера ранней стадии апоптоза.
Флуоресцентными зондами, впервые использованными для оценки мембранного потенциала в отдельных клетках и органеллах, были липофильные симметричные цианиновые красители, такие как дигексилоксакарбоцианин (DiOC6(3)) и родамины, например, родамин 123. Эти красители свободно проникают через клеточные мембраны как по нернстовскому (зависящему от заряда) механизму, так и по их сродству к липофильным компонентам клеточных структур. Поскольку между цитозолем и внешней средой окружающей клетки, обычно существует внутренний отрицательный градиент потенциала в десятки милливольт, а между внутренней частью митохондрий и цитозолем этот показатель составляет более ста милливольт, равновесная концентрация катионного индикатора будет выше в митохондриях, чем в цитозоле, и выше в цитозоле, чем в среде. При этом гиперполяризация мембран будет способствовать дополнительному поступлению красителя из внешней среды, уменьшая общую флуоресценцию суспензии; напротив, снижение потенциала (деполяризация) приведет к высвобождению красителя в среду с последующим увеличением фоновой флуоресценции. Следует отметить, что спектры возбуждения и флуоресценции многих красителей хотя и зависят от их концентрации и локализации внутри клетки, однако этих изменений недостаточно, чтобы однозначно отличить и оценить флуоресценцию красителя в митохондриях от его флуоресценции в цитозоле.
Техника, включающая использование красителя 5,5,6,6'-тетрахлор-1,1',3,3' тетраэтилбензимидазоилкарбоцианин йодида (JC-1), была разработана для обнаружения ΔΨM в интактных изолированных митохондриях и в тканях и позволяла дифференцировать здоровые и апоптотические клетки.

LumiTracker Mito JC-1 – липофильный катионный краситель, который проникает в митохондрии потенциал-зависимым способом. В природной мономерной форме краситель проявляет зеленую флуоресценцию. В высоких концентрациях (водные растворы выше 0,1 мкМ) и на гиперполяризованных мембранах JC-1 образует обратимые комплексы – J-агрегаты. В отличие от мономерной формы JC-1, J-агрегаты проявляют возбуждение и флуоресценцию в красной области спектра. Таким образом, в здоровых клетках с нормальным ΔΨМ краситель накапливается в поляризованных митохондриях и образует красные флуоресцирующие J-агрегаты, а в апоптотических клетках с деполяризованными митохондриями JC-1 не достигает достаточной концентрации, чтобы инициировать образование агрегатов J, сохраняя тем самым свою первоначальную зеленую флуоресценцию.

Анализ отношения красной/зеленой флуоресценции красителя в митохондриях и определение коэффициента флуоресценции – эффективный инструмент для оценки мембранного потенциала и определения процента митохондриальной деполяризации методами проточной цитометрии, флуоресцентной микроскопии, конфокальной микроскопии и с помощью флуоресцентного ридера. Принципиально важно, что соотношение интенсивности красной и зеленой флуоресценции зависит только от мембранного потенциала и не зависит от других факторов, таких как форма, размер и плотность митохондрий.
При оценке с помощью проточной цитометрии необходимо учитывать, что краситель JC-1 и в мономерной форме, и в виде J-агрегатов возбуждается с помощью лазера с длиной волны 488 нм.
Мономерный JC-1 проявляет зеленую флуоресценцию (поглощение/излучение: 510 нм/527 нм), которую можно измерить в канале FL-1 (FITC, GFP). J-агрегаты флуоресцируют в красной области спектра (поглощение/излучение: 585 нм/590 нм) и измеряются в канале FL-2 (PE, R-PE, RD1) (график). Следовательно, здоровые неапоптотические клетки будут обнаруживаться как в канале FL-1, так и в канале FL-2, тогда как клетки со сниженным митохондриальным потенциалом будут проявлять интенсивную флуоресценцию в FL-1 и слабый сигнал в FL-2.

Технические характеристики:

• Молекулярная масса: 652.24
• Молекулярная формула: C₂₅H₂₇Cl₄IN₄
• Растворимость (хорошая): ДМСО
• Контроль качества: ЯМР 1H и ВЭЖХ-МС (95+%)
• Максимум возбуждения/ флуоресценции (мономерная форма): 510 нм/527 нм
• Максимум возбуждения/ флуоресценции (J-агрегаты): 585 нм/590 нм

Применение: флуоресцентная микроскопия, проточная цитометрия.