Набор реагентов для определения апоптоза TUNEL assay kit с красителем CF640. Арт. G1505-100T

Метод TUNEL (TdT dUTP Nick End Labeling ) предназначен для количественной оценки степени фрагментации ДНК на поздней стадии апоптоза. Суть метода заключается в выявлении разрывов ДНК, возникающих под действием эндонуклеаз. На начальных этапах апоптоза величина фрагментов составляет 50–300 т.п.н., позднии стадии апоптоза характеризуются образованием фрагментов размером 180-200 п.н. Характерной чертой данного этапа является образование большого числа 3'-ОН-концов. Терминальная дезоксинуклеотидилтрансфераза (TdT) представляет собой независимую от матрицы ДНК-полимеразу, которая катализирует связывание дезоксинуклеотидов с 3'-ОН-концами фрагментов ДНК. Для оценки степени фрагментации ДНК в реакционную среду вводится меченный флуорофорами дезоксиуридинтрифосфат (dUTP), который под действием фермента TdT встраивается в 3'-OH-конец. Интенсивность флюоресценции обратно пропорциональна величине фрагментов ДНК: при полном расщеплении на фрагменты величиной 180-200 п. сигнал будет наиболее ярким, так как количество разрывов ДНК в этом случав максимальное. Детекция флуоресценции осуществляется с помощью флуоресцентной микроскопии или проточной цитометрии. Данный набор реагентов предназначен для выявления апоптотических клеток в срезах тканей, фиксированных парафином, срезах замороженных тканей, цитологических образцах. В качестве флуоресцентной метки dUTP используется CF640. Измерение флуоресценции — в диапазоне длин волн поглощения/испускания 642 нм/662 нм.