Высокопроизводительная система NanoGenerator Flex-S Plus для синтеза липидных наночастиц, нанолипосом и PLGA-наночастиц

Высокопроизводительная система NanoGenerator Flex-S Plus предназначена для синтеза липидных наночастиц и липосом. Она идеально подойдёт для подбора условий формирования наночастиц и скрининга мРНК-кандидатов и других инкапсулянтов (ранние доклинические исследования и разработки). В качестве инкапсулянтов могут быть использованы самые разнообразные молекулы: мРНК, плДНК, миРНК, РНП CRISPR/Cas и пр.

Прибор позволяет синтезировать 1-32 образца за запуск и 96 образцов за 1 час, объёмом от 100 до 500 мкл. Кроме того, система оснащена роботизированной системой ввода растворов, что полностью освобождает оператора от необходимости раскапывания и пипетирования. Для управления размером наночастиц предусмотрена возможность выбора скорости потока (3 или 4 мл/мин).

Все системы линейки NanoGenerator отличаются стабильным Z-средним размером наночастиц с низким индексом полидисперсности (0,05-0,2), в том числе при масштабировании синтеза.

Принцип создания и работы липидных наночастиц

Липидные наночастицы являются крайне перспективными системами доставки генетической информации в клетки. Они, с одной стороны, защищают инкапсулянт от деградации в организме, а с другой эффективно проникают в клетки. Именно липидные наночастицы входят в состав первых одобренных FDA мРНК вакцин BioNTech/Pfizer и Moderna.

Такие частицы состоят из различных соотношений нейтрального структурного липида, холестерина, ПЭГ-липида и ионизируемого/катионного липида. Создать липидные наночастицы можно с помощью микрофлюидных систем.

Основными сложностями при создании липидных наночастиц являются:

• Подбор оптимального состава липидов (нейтрального структурного липида, холестерина, ПЭГ-липида и ионизированного липида).
• Воспроизводимость размеров наночастиц.
• Масштабируемость производства.

Системы NanoGenerator прекрасно решают последние две проблемы и позволяют сосредоточиться на решении первой задачи. В качестве примера приведены результаты трансфекции клеточных линий K562, Hep2G и первичных Т-клеток человека липидными наночастицами с eGFP-мРНК, синтезированными на приборе NanoGenerator Flex-S.

Рис.1. GFP-LNP, синтезированные на NanoGenerator Flex-S. Средний размер – 67,3 нм. PDI 0,106

Рис.2. Экспрессия GFP в клеточных линиях K562 (справа) и Hep2G (слева) спустя 48 часов после трансфекции GFP-LNP, синтезированными на NanoGenerator Flex-S

Рис.3. GFP-положительная популяция контрольных (не трансфецированных) и трансфецированных GFP-LNP (синтезированными на NanoGenerator Flex-S) клеточных линий первичных Т-клеток через 16, 40 и 64 часа. Клетки были окрашены реагентом Biolgend 7-AAD Viability Staining (1:50) в течение 10 минут